將抗原或
抗體固定在進(jìn)程稱為包被（coating）。換言之，包被便是抗原或抗體結(jié)合到固相載體外表的進(jìn)程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的效果于。
這種物理吸附對錯(cuò)特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附才能是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體外表。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)合多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)露出于外，因而抗體的包被一般均選用直接吸附法。
蛋白質(zhì)抗原大多也可選用與抗體類似的辦法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí)，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充沛露出，在這種情況下，直接包被效果欠安，能夠選用直接的捕獲包被法，即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后經(jīng)過抗原抗體反響使抗原固相化。此直接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體外表，其抗原決定簇也得以充沛露出。
直接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析效果，包被在固相上的抗原純度大大進(jìn)步，因而含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改進(jìn)，重復(fù)性亦佳。直接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少，僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可選用特別的包被辦法。例如，在檢測抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合�？蓪⒕郾揭蚁┌逑冉�(jīng)紫外線照耀（例如30W紫外燈，75cm照耀12小時(shí)），以添加其吸附性能。
固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預(yù)包被，也可進(jìn)步核酸的結(jié)合力。也可用親和素生物素體系作直接包被，即用親和素先包被載體，然后參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、牢固，已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。
脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合，可將其在有機(jī)溶劑（例如乙醇）中溶解后參加ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或涼風(fēng)吹干，待酒精蒸發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相外表�？剐牧字贵w的ELISA試劑一般選用這種包被辦法。
以上就是上海恒遠(yuǎn)整理出來告訴大家什么是ELISA包被方式，上海恒遠(yuǎn)致力于提供生命科學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)服務(wù)，提供全方位實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)，為廣大科研工作者大大節(jié)省了重復(fù)勞動(dòng)的時(shí)間和精力，我們有過硬的技術(shù)咨詢和完善的售后服務(wù)，為您解決后顧之憂。
我司正在進(jìn)行“積分換豪禮”，“預(yù)存返現(xiàn)”，“推薦享現(xiàn)金紅包”等優(yōu)惠活動(dòng)，詳情可來電咨詢我司業(yè)務(wù)員！
總訪問量：7912987 管理登錄
