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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)血清為何要稀釋以及步驟

點(diǎn)擊次數(shù)：13410 發(fā)布時間：2019/7/31 9:01:32

每一盒elisa試劑盒里邊都有一份對應(yīng)的闡明書，而每一份闡明書里都會有寫樣本和稀釋液的稀釋份額，為何樣本都需求稀釋呢?今天的文章中，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司將為您剖析：為何ELISA試驗(yàn)血清樣本都需求稀釋?

在ELISA試劑盒試驗(yàn)血清為何要稀釋？有兩個原因：

1.競賽按捺對比顯著，應(yīng)稀釋競賽物；

2.以下降非特異性反響，使特異性的抗原抗體反響充分體現(xiàn)出來。

血清稀釋用通常的PBS即可，可加1％的BSA，能有用下降ELISA本底，當(dāng)然假如你嫌費(fèi)事我覺得用生理鹽水代替PBS也不大。不論你是用直接競賽還是直接競賽，血清的稀釋倍數(shù)必定要事前確定，但也不必一點(diǎn)點(diǎn)，你做一個預(yù)試驗(yàn)即可，挑選OD在1.0左右的稀釋倍數(shù)，即你的ELISA中陰性孔OD在1.0，這么作出來的曲線對比靈敏。

ELISA試劑盒試驗(yàn)稀釋血清的步驟：

1、先把蛋白稀釋一定的倍數(shù)，比如說10倍、20倍稀釋（這樣可以大體確定一個參數(shù)），將抗原進(jìn)行一系列稀釋包被微量反應(yīng)板

2、再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進(jìn)行孵育后洗滌，再加酶結(jié)合物進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)孵育洗滌后，加底物溶液顯色，終止反應(yīng)后分別測定O.D值，選擇O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為zui適包被濃度。一般總是要選擇那個O.D值稍大于1.0，而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別。

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