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ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,裸鼠ELISA試劑盒,倉鼠ELISA試劑盒,標準品,培養(yǎng)基和生物試劑等

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人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA試劑盒實驗詳情

點擊次數(shù):13006   發(fā)布時間:2016/1/21 9:17:01

產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
檢測范圍:5pg/ml-300pg/ml
使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)含量。
人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)elisa試劑盒實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)水平。用純化的人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2),再與 HRP 標記的可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值), 通過標準曲線計算樣品中人可溶性磷脂酶 A2(sPL-A2)濃度。
人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA試劑盒操作步驟:
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
200pg/ml   5 號標準品   150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
100pg/ml   4 號標準品   150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
50pg/ml    3 號標準品   150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
25pg/ml    2 號標準品   150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
12.5pg/ml  1 號標準品   150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品*終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 
4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。 
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度( OD 值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
人可溶性磷脂酶A2(sPL-A2)ELISA試劑盒注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值大于標準品孔孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)( n 倍)后再測定,計算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物科技有限公司

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