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篩選elisa實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)步驟中的重點(diǎn)之重

點(diǎn)擊次數(shù):12875   發(fā)布時(shí)間:2015/3/3 9:04:48

     不少客戶反應(yīng),看似簡單的elisa實(shí)驗(yàn)在操作過程中稍有不合理的地方,會(huì)造成很多問題,影響檢測(cè)精度,降低測(cè)試質(zhì)量。如花板,假陽性,全彩色,全彩色,顏色空間的低等問題,這就要求我們?cè)趯?shí)驗(yàn)過程多做總結(jié),逐步完善,篩選elisa實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)步驟中的重點(diǎn)之重。
    :包衣液的選擇
    碳酸鹽緩沖液通常選擇9。6。但有時(shí)因?yàn)闇y(cè)試需求,數(shù)據(jù)包緩沖溶液是一種特殊的原料可采用中性包裝。應(yīng)注意以下原則:蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合,取決于在固相的疏水性基團(tuán)和疏水性相互作用的載體表面蛋白分子的結(jié)構(gòu),物理吸附是非特異性的,蛋白分子量,等電點(diǎn),大集中,小分子蛋白蛋白質(zhì)通常含有疏水基團(tuán)越多,所以更容易吸附在固相載體表面。測(cè)試也有很強(qiáng)的理論于實(shí)踐,看*后一個(gè)可以應(yīng)用到我們的測(cè)試。除了剛才提到的9。6碳酸鹽緩沖液常用的涂料溶液,和磷酸鹽緩沖液和7-8 7。2 -緩沖。
    第二:關(guān)閉
    以下包之后是無關(guān)的蛋白質(zhì)溶液濃度高,涂層工藝。隨函附上使大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,和干擾物質(zhì)的免疫排斥和吸附步驟。elisa試劑盒常用的密封:0。05% - 0。5%牛血清白蛋白;10%或1%明膠牛血清;脫脂奶粉,價(jià)格相對(duì)低廉,可用于高濃度(5%~10%);和一些罕見的使用各種動(dòng)物血清(主要是為了消除類似的蛋白和酪蛋白等干擾)。但到底選擇什么,根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體實(shí)踐。
    第三:洗板
    可以說,在中操作,清洗是在主要的關(guān)鍵技術(shù)。由于聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍存在的,為了實(shí)現(xiàn)自由酶與客觀相結(jié)合的標(biāo)記的分離,在板料孔中殘留游離和吸附的非特異性干擾物質(zhì)的去除,洗滌,并應(yīng)將干擾物質(zhì)洗滌下來的非特異性吸附。所以在洗衣板會(huì)有一定的誤差,非常人的因素(當(dāng)然也有洗衣機(jī)除條件),是不完整的或弦清孔,系統(tǒng)的影響是如此敏感,但不小。
    第四:加抗體(抗標(biāo)本和兩個(gè))
    注意的槍頭,槍頭。樣品用稀釋稀釋,也可以用稀釋的閉解。如果要添加兩個(gè)電阻,但也要注意兩個(gè)反工作濃度的廢物,太高,太低的光的顏色。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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